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【關(guān)鍵詞】PTEN;,環(huán)氧化酶

［摘要］目的：通過檢測抑癌基因pten和環(huán)氧化酶2(COX2)在大腸癌中的表達(dá)，探討其在大腸癌中的意義。方法：應(yīng)用SP法免疫組化方法檢測10例正常大腸黏膜、80例大腸癌組織中PTEN和COX2的表達(dá)。結(jié)果：正常大腸黏膜中PTEN為強(qiáng)陽性表達(dá)，在大腸癌中有41.2%為陰性或弱陽性表達(dá)，明顯低于正常組(P<0.01)；COX2在正常大腸黏膜中80%為陰性表達(dá)，而在大腸癌中陽性率為72.5%，顯著高于正常組的表達(dá)(P<0.01)；在大腸癌中PTEN和COX2存在負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：抑癌基因PTEN和COX2在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。

［關(guān)鍵詞］PTEN;環(huán)氧化酶2;大腸癌

ExpressionandSignificanceofTumorSuppressorGenePTENandCyclooxygenase2inColorectalCancer

Abstract:ObjectiveTodetecttheexpressionoftumorsuppressorgenePTENandcyclooxygenase2(COX2)incolorectalcancer，andanalyzetheirsignificance.MethodsSPimmunohistochemicalmethodwasusedtodetecttheexpressionofPTENandCOX2in10casesofnormalcolorectalmembraneand80casesofcolorectalcancer.ResultsTheexpressionofPTENinallofthenormalcolorectalmembranewerepositive，andexpressionofPTENin41.2%casesofcolorectalcancerwerelowornegative，whichwasmuchlowerthanthenormalgroup(P<0.01).ThenegativerateofCOX2innormalgroupwas80%，whileincolorectalcancer，thepositiveratewas72.5%，whichwassignificantlyhigherthannormalgroup(P<0.01).AnegativecorrelationwasobservedbetweentheexpressionofPTENandCOX2.ConclusionOurdatasuggestthatPTENandCOX2playanimportantroleinthedevelopmentofcolorectalcancer.

Keywords:PTEN;COX2;Colorectalcarcinoma

大腸癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，對其癌變的機(jī)制一直是研究的熱點(diǎn)。抑癌基因與張力蛋白同源10q丟失的磷酸酶基因(Phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosome10，PTEN)與各種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在大腸癌也發(fā)現(xiàn)有PTEN基因表達(dá)的異常。環(huán)氧化酶2(Cyclooxygenase2，COX2)在很多腫瘤中呈高表達(dá)并與腫瘤的形成密切相關(guān)，但其作用機(jī)制尚不清楚。本文擬通過檢測大腸癌中PTEN和COX2的表達(dá)情況，并探討兩者之間的相關(guān)關(guān)系。

1材料和方法

1.1標(biāo)本來源收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1996年至2004年間大腸手術(shù)及活檢標(biāo)本共90例(患者術(shù)前均未接受過化療、放療)，其中正常大腸黏膜10例，大腸癌80例，其中高分化30例，中分化27例，低分化23例，35例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有標(biāo)本均用10％甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，并經(jīng)HE染色后由病理學(xué)專家確診。

1.2主要試劑鼠抗人PTEN單抗(工作型)、兔抗人COX2(濃縮型，工作濃度為1∶100)、SP免疫組化試劑盒及DAB顯色液均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、梯度酒精水化至水，微波修復(fù)，自然冷卻至室溫。采用SP法免疫組織化學(xué)染色，DAB顯色3min～5min，蘇木素復(fù)染5min，鹽酸酒精分化數(shù)秒，流水返藍(lán)15min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為空白對照，已知陽性片作陽性對照。在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.4免疫組化結(jié)果判定PTEN及COX2陽性均定位于胞漿及胞膜，呈黃色或棕黃色顆粒。采用雙盲法統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞所占的百分比，根據(jù)陽性細(xì)胞的比例分為以下四個(gè)等級：<5％為陰性(-)，5％～25％為弱陽性(＋)，26％～50％為陽性(++)，>50％為強(qiáng)陽性(+++)。

1.5統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取雙側(cè)α=0.05。

2結(jié)果

2.1PTEN在大腸癌中的表達(dá)情況，見表1。

表1大腸癌中PTEN的表達(dá)（略）

注：與正常組相比，P<0.05

PTEN在正常大腸黏膜中均為強(qiáng)陽性表達(dá)，而在大腸癌中有33例PTEN蛋白表達(dá)缺乏(陰性組)或減少(弱陽性組)，占41.2％，顯著低于其在正常大腸黏膜中的表達(dá)(χ2=20.911，P=0.000<0.01)。同時(shí)PTEN與大腸癌的分化程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.649，P=0.590>0.05)。

2.2COX2在大腸癌中的表達(dá)情況，見表2。

表2COX2在大腸癌中的表達(dá)情況（略）

*注：與正常組相比，P<0.05。

COX2在正常大腸黏膜中主要以陰性表達(dá)為主，占80％(8/10)，在大腸癌中的陽性率為72.5％(58/80)，顯著高于其在正常大腸黏膜中的表達(dá)(χ2=13.163，P=0.004<0.01)。同時(shí)COX2與大腸癌的分化程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.890，P=0.692>0.05)。

2.3PTEN、COX2與大腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌中PTEN陽性表達(dá)率為86.7％(39/45)，而有轉(zhuǎn)移的陽性表達(dá)率為74.3％(26/35)，低于前者(χ2=8.082，P=0.044<0.05)。COX2在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽率為64.4％(29/45)，有轉(zhuǎn)移的陽性率為82.9％(29/35)，與前者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.003，P=0.046<0.05)。見表3。

表3PTEN、COX2與大腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系（略）

*注：與無轉(zhuǎn)移組相比，P<0.05

2.4大腸癌中PTEN與COX2的相關(guān)性經(jīng)spearman等級相關(guān)分析，在大腸癌中PTEN與COX2呈負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.215，P=0.042<0.05)。

3討論

PTEN基因定位于10q23.3，編碼由403個(gè)氨基酸組成的蛋白［1］。研究表明該蛋白具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶的雙重活性，可使第二信使PIP3去磷酸化，阻斷其下游Akt激酶的活化，進(jìn)而阻斷相應(yīng)的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，從而抑制細(xì)胞的生長［2］。PTEN與多種類型惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)PTEN在正常大腸黏膜中均為強(qiáng)陽性表達(dá)，而在大腸癌中陰性和弱陽性表達(dá)的占41.2%，與正常組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明PTEN在大腸癌中表達(dá)下調(diào)，這與大多數(shù)學(xué)者的研究相一致［3，4］，提示PTEN在大腸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)PTEN的表達(dá)與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的PTEN陽性率低于無轉(zhuǎn)移組，表明PTEN蛋白陰性的腫瘤更具轉(zhuǎn)移性。但陳小巖［5］等的研究表明PTEN的表達(dá)與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移無關(guān)，提示還要作進(jìn)一步的研究來揭示PTEN與大腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。環(huán)氧化酶是催化前列腺素樣物質(zhì)合成的關(guān)鍵酶，由COX1和COX2組成，其中COX1在正常組織恒定表達(dá)，主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞的正常生理活動，保持內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定，而COX2在正常組織中幾乎不表達(dá)，但可被生長因子、細(xì)胞因子、腫瘤促進(jìn)子等誘導(dǎo)表達(dá)，并可刺激腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和浸潤等［6］，也是研究的熱點(diǎn)。本研究結(jié)果表明COX2在正常組織中只有兩例表現(xiàn)為弱陽性，其余皆為陰性表達(dá)；而在大腸癌組織中陽性率為72.5%，顯著高于正常組的表達(dá)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的COX2陽性率高于無轉(zhuǎn)移組，表明COX2在大腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中起著一定的作用，這與大多數(shù)學(xué)者的研究一致［7，8］，本研究結(jié)果還表明在大腸癌中PTEN的表達(dá)與COX2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，即PTEN蛋白表達(dá)高的組織其COX2的表達(dá)較低，而PTEN蛋白表達(dá)下調(diào)的組織中COX2表達(dá)較高。Germain［9］等的研究表明在PTEN突變的細(xì)胞系中，Akt的磷酸化水平較高的細(xì)胞中COX2表達(dá)也較高，轉(zhuǎn)染能抑制Akt磷酸化的載體后可導(dǎo)致COX2表達(dá)下調(diào)，而轉(zhuǎn)染了能激活A(yù)kt激酶的載體后COX2表達(dá)上調(diào)，提示Akt信號通路可調(diào)節(jié)COX2的表達(dá)，而PTEN可通過調(diào)控Akt的表達(dá)而影響COX2的表達(dá)，從而引起相應(yīng)的細(xì)胞增生或凋亡。而Honio［10］等認(rèn)為COX2可通過調(diào)節(jié)PTEN和Akt來抑制由Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。究竟是PTEN調(diào)控COX2還是COX2調(diào)控PTEN，具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

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